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名稱：支原體檢測試劑盒

貨號：CA1080
保存：4℃保存，有效期為2年，Hoechst工作液需要避光保存。
產品內容：
Hoechst 33258工作液
50ml
固定液
50ml
抗熒光衰減封片液
10ml
說明書
1份
產品簡介：
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區(qū)域，因為支原體的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm。
操作步驟：
貼壁細胞：
1、被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。
2、5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細胞：
1、收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。
2、將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。